循环棕榈酸（PA）通常被认为来源于饮食和内源性合成，并且与心血管疾病（CVD）呈负相关。然而，目前尚不清楚肠道微生物群是否调节循环PA并增强CVD风险。在此，作者证明，在CVD患者中，循环PA升高伴随高凝状态和肠道Bacteroides thetaiotaomicron（BT）丰度增加。PA通过抑制主要内源性抗凝剂活化蛋白C（APC）和促进血小板活化来促进凝血。重要的是，BT能够合成PA，并且高脂饮食会放大肠道BT的定植。作者的研究发现，BT移植会升高血浆PA并触发高凝状态，而不会改变宿主脂肪生成。橙皮苷，一种膳食类黄酮，可抑制PA-APC相互作用，从而预防PA或BT移植诱导的高凝状态。总体而言，作者揭示了高脂饮食对肠道BT定植的促进作用，这会升高循环PA和CVD风险，提出了通过靶向PA和BT来控制CVD的方法。

1、棕榈酸（PA）通过抑制活化蛋白C（APC）并增强血小板激活，具有直接的促凝血作用。

心血管疾病（CVD）患者的血液表现出高凝状态，这通过血浆复钙时间（PRT）缩短得以体现（图1A）。采用电喷雾电离负离子（ESI⁻）和正离子（ESI⁺）模式，通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）对血样中的血浆代谢物进行分析。通过ESI⁻模式进行的脂肪酸分析共鉴定出23种脂肪酸，火山图分析（图1D）和热图（图1E）显示，CVD组中棕榈酸（PA）水平显著升高。受试者工作特征（ROC）曲线显示，PA的曲线下面积（AUC）为0.8015（图1F）。CVD患者血浆中PA的平均浓度为3.489 ± 0.382 μg/mL，而正常对照组为1.959 ± 0.2199 μg/mL（图1G）。在调整年龄、性别和BMI等变量后，两组间PA水平差异仍具有统计学意义。此外，血浆PA水平与PRT呈负相关（图1H）。

为探究棕榈酸（PA）与高凝状态及肠道细菌之间的潜在关联，作者采集了心血管疾病（CVD）患者和健康个体的粪便样本，进行16S rRNA基因测序分析。利用第一和第二主成分（PC1与PC2）评估两组样本，结果显示二者之间存在显著分离（图1I）。如图1J所示，在属分类水平上，CVD组中Bacteroides的相对丰度显著升高。尤为值得注意的是，CVD患者粪便中Bacteroides thetaiotaomicron（BT）的拷贝数显著高于对照组（图1K），且与PA水平呈正相关（图1L）。

图1. 血浆棕榈酸（PA）水平升高伴随高凝状态及肠道Bacteroides thetaiotaomicron（BT）丰度增加

2、肠道共生菌Bacteroides thetaiotaomicron（BT）能够合成PA。

在BT培养物的上清液中检测到高水平的PA（图2A）。值得注意的是，外源性PA的加入加速了凝血过程，表现为PRT（图2B）和活化部分凝血活酶时间（APTT）（图2C）的缩短。然而，凝血酶原时间（PT）并无显著变化（图2D）。作者还检测了其他脂肪酸，包括棕榈油酸（POA）、肉豆蔻酸（MA）、油酸（OA）和反式油酸（EA）对PRT、APTT和PT的影响，结果显示这些脂肪酸均无显著作用（图2B–2D）。

PA加速了由10% FeCl₃诱导的颈动脉血栓小鼠模型中的血管闭塞，表明其可促进动脉血栓形成（图2E）。此外，在深静脉血栓小鼠模型中，0.4、1.2 和 3.6 mg/kg 的PA分别使静脉血栓体积增加了17.65%、63.24% 和 123.9%（图2F）。下腔静脉的H&E染色也显示PA组血栓发生率更高。作者进一步采用三种小鼠出血模型（隐静脉损伤、断尾和部分肝切除模型）评估PA的止血效果。与生理盐水组相比，PA处理显著缩短了出血时间（图2G–2K）。

 图2 肠道BT可产生PA，诱导血液高凝状态

3、高脂饮食（HFD）促进BT在肠道中的定植，从而升高循环PA水平并加剧血栓形成。

为进一步评估BT对循环PA及高凝状态的影响，作者向经抗生素处理的小鼠移植BT。与对照小鼠相比，接受BT移植的小鼠血浆PA水平显著升高，而移植其他细菌的小鼠血浆PA水平无显著变化（图3B）。BT移植小鼠的血浆脂肪酸谱发生明显改变，其中PA含量显著增加（图3C）。此外，作者分析了宿主肝脏和肠道中参与PA转运与代谢的相关基因表达，包括脂肪酸合酶（FAS）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）、乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ），结果显示BT定植未引起显著差异（图3D–3G）。这表明BT移植并未影响宿主自身PA的合成。

不出所料，来自BT定植小鼠的血浆PRT（图3H）和APTT（图5I）显著缩短，APC活性亦明显降低（图3J）。与对照组相比，BT小鼠尾出血时间亦明显缩短（图3K）。同样，在肝切除模型中，BT小鼠肝脏出血量减少（图3L、3M）。在10% FeCl₃诱导的颈动脉血栓模型中，BT小鼠颈动脉血流下降更快，提示血栓形成加速（图3N）。

与正常对照饮食（NCD）组相比，高脂饮食（HFD）喂养的小鼠体内BT拷贝数及PA水平均显著升高（图3O、3P），提示HFD有助于BT在宿主肠道中的定植。进一步比较发现，与NCD喂养的BT移植小鼠相比，HFD喂养的BT移植小鼠中BT的PA生物合成相关基因（如fabD、fabG、fabF及fabZ）表达上调（图3Q）。

图3 BT移植升高循环棕榈酸（PA）并诱发高凝状态，但不改变宿主内源性脂肪生成。

4、橙皮苷（Hesperidin）可阻断PA与APC的相互作用，抑制其促凝效应。

上述结果表明，PA可通过抑制APC诱导血液高凝状态，进而促进心血管疾病（CVD）的发生。这促使作者筛选能够干扰PA-APC相互作用、从而抑制PA促凝活性的化合物。橙皮苷（Hesperidin），一种重要的膳食类黄酮，显示出阻断PA对APC活性抑制作用的能力，而本身不直接影响该酶活性。表面等离子共振（SPR）实验证实，橙皮苷可干扰PA与APC的结合（图4A）。20 μM PA使APC活性降至14.52% ± 4.84%，而加入0.5、5和50 μM橙皮苷后，APC活性分别回升至50% ± 4.84%、87.1% ± 9.68%和104.3% ± 3.88%（图4B）。橙皮苷本身不与APC直接相互作用。一致地，PA对APC介导的FVα水解的抑制作用也被橙皮苷削弱（图4C和4D）。此外，橙皮苷还抑制了PA促进凝血酶原向凝血酶转化的作用（图4E）。

橙皮苷还能抑制BT移植所诱发的高凝状态（图4I）。为进一步探究口服橙皮苷的抗血栓活性，给正常及BT移植的C57小鼠连续7天灌胃给予橙皮苷（50 mg/kg与100 mg/kg），随后用FeCl₃颈动脉模型评估血栓形成。结果显示，连续口服橙皮苷7天对正常和BT移植小鼠的PA诱导的血栓形成均具有预防作用（图4J与4K）。

图4. 橙皮苷抑制PA及BT移植诱导的促凝效应

总之，本研究表明，Bacteroides thetaiotaomicron（BT）这一重要的肠道共生菌，在心血管疾病（CVD）患者肠道中的丰度更高，并且可能促进血浆中棕榈酸（PA）水平的升高及高凝状态的形成。这一发现揭示了血浆 PA 的另一来源——此前人们认为 PA 主要来自膳食脂肪以及体内的从头脂肪生成和脂肪分解。尽管 BT 被广泛视为对人体有益的肠道菌群之一，但本研究却提示了其潜在的“阴暗面”。高脂饮食（HFD）-BT-PA-CVD 轴可能揭示了一种与心血管疾病风险相关的潜在病理生理机制。

因此，这项发现，不只是一个新机制的揭示，更是临床防控的新契机。心血管风险并非全由“吃多少油”决定，而是“吃油 + 菌群”共同作用。这也解释了临床上常见的疑问——有人饮食类似，却心梗风险差异巨大。

图5 高脂饮食（HFD）-BT-PA-CVD 轴示意图